Com direção de Sam Raimi, o mesmo que dirigiu os outros dois longas da franquia, o personagem-título, vivido por Tobey Maguire, vai ter de enfrentar mais vilões do que nos outros dois filmes.

Ele vai enfrentar Harry Osborn (James Franco), filho do Duende Verde, Venom, um simbionte que veio do espaço e invade o seu apartamento e domina o seu corpo, transformando sua roupa vermelha e azul, em completamente preta, Eddie Brock (Topher Grace) busca uma oportunidade no mesmo jornal de Peter, vendendo fotos do aracnídeo por um preço mais baixo a J. Jonah Jameson (J.K. Simmons), o editor caricato do jornal. J.J., aliás, protagoniza uma das cenas mais engraçadas do filme.

Outro vilão é o Homem-Areia (Thomas Haden Church), o assassino do tio de Parker. Um dos problemas do longa é o ritmo e a inclusão de muitos personagens, de modo que nenhum deles tem a história aprofundada.

Entre os três, é que oferece menos emoção ao espectador, que pode sentir falta deste sentimento na franquia.